PROGRAMMA BIOCHIMICA APPLICATA (AA 2023/2024)

Metodologie Biochimiche:

Principi generali delle metodologie biochimiche (i.e. progettare, eseguire un esperimento ed interpretarne i dati)

Tecniche di separazione (proteine, DNA, RNA)

- purificazione da fonte biologica (cellule, tessuti)

- frazionamento miscele (centrifugazione, precipitazione)

- cromatografia (scambio ionico, affinità, ripartizione, adsorbimento, HPLC)

- Dialisi ed ultrafiltrazione

Tecniche di analisi (proteine, DNA, RNA)

- elettroforesi (SDS-PAGE, Isoelectrofocusing; 2D-PAGE e applicazioni in proteomica, Agarosio)

- dosaggi quantitativi (spettrofotometrici, UV-VIS, Fluorescenza, luce polarizzata; luminometria; radioisotopici)

- tecniche immunochimiche (utilizzo anticorpi e loro produzione, blotting di acidi nucleici, ELISA, RIA, Immunoprecipitazione, Citofluorimetria)

- PCR e RealTime-PCR

- Analisi dell’espressione genica: DNA microarray

Produzione di proteine ricombinanti.

- clonaggio

- sistemi di espressione (procarioti, eucarioti)

- mutagenesi (sitospecifica e casuale)

- purificazione di proteine ricombinanti

- Vaccini ricombinanti e Vaccini a DNA

Enzimi ed enzimologia clinica:

- Enzimi in diagnostica (indicatori diagnostici nelle analisi chimico-cliniche, metodi di determinazione delle relative attività enzimatiche, metodi immunoenzimatici)

- Enzimi serici. (significato diagnostico; enzimi di interesse clinico: lattato deidrogenasi, creatina chinasi, fosfatasi alcalina, acetilcolinesterasi, transaminasi, alcol-deidrogenasi; diagnosi nell’infarto del miocardio: CKMB, Transaminasi, LDH1,LDH2, αHBDH, Mioglobina, Troponina)

- Profili enzimatici: cuore, fegato e pancreas

- Enzimi terapeutici (Enzimi come farmaci, Enzyme replacement therapy (ERT); stabilità degli enzimi; modificazione degli enzimi con PEG)

- Enzimopatie (i.e. disordini del metabolismo di: acidi nucleici, proteine, carboidrati, acidi grassi; Accumulo lisosomiale; disordini mitocondriali e nei perossisomi)

- Biosensori

Testi consigliati e bibliografia

• Testo di Biochimica

Testo a scelta tra:
• Bonaccorsi MC, Contestabile R, Di Salvo M, “Metodologie biochimiche” - Zanichelli (2019)

- Maccarrone M. "Metodologie biochimiche e biomolecolari" - Zanichelli (2019)

- Wilson K, Walker J, “Biochimica e biologia molecolare: Principi e tecniche” - Raffaello Cortina Editore (2006)

• Materiale didattico fornito dal docente